Испытание дезинфицирующей активности Интерцид в отношении возбудителя африканской чумы свиней

В системе санитарных, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий, обеспечивающих благополучие страны по инфекционным болезням, повышение продуктивности животных и санитарное качество продуктов, сырья и кормов животного происхождения, дезинфекция занимает одно из важных мест. Под дезинфекцией понимают уничтожение на объектах внешней среды или удаление из них патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Основное назначение дезинфекции – разорвать эпизоотическую цепь путем воздействия на ее важнейшее звено - фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму (1, 2).

В последние годы на рынке дезинфи­цирующих средств представлен весьма большой ассортимент препаратов как отечественного, так и зарубежного про­изводства, но при всем многообразии дезинфицирующих средств, количество компонентов, входящих в их состав, весьма ограничено, причем целый ряд соединений обладает высокой бактерио- и вирусстатической активностями и низким бактерицидным и вирулицидным действием, что не позволяет им эффективно обеззараживать контаминированные поверхности, особенно загрязненные органическими веществами. Особую актуальность проблема внедрения новых высокоэффективных дезинфектантов приобрела в последние годы, в связи с продолжающимся распространением по территории РФ занесенной в 2007 году африканской чумы свиней, представляющей реальную угрозу свиноводству страны (3, 4, 5).С 2007 года (первая вспышка) африканская чума свиней (АЧС) распространилась на 32 субъекта Российской Федерации. Прямой ущерб для агропромышленного комплекса РФ составил более 30 млрд. рублей (2).

При АЧС отсутствуют средства специфической профилактики и, как показал анализ эпизоотических вспышек болезни, ведущую роль в их возникновении играет «человеческий фактор» т.к. вирус АЧС перевозится различными видами транспорта из одного региона в другой, очевидно, что в предотвращении дальнейшего распространения болезни одним из важнейших мероприятий является проведение эффективной экспресс дезинфекции (2, 4).

Учитывая то, что для большинства дезинфектантов не изучена их вирулицидная активность в отношении вируса АЧС, целесообразно проведение работ по обеспечению ветеринарной дезинфекционной практики протестированными высокоэффективными дезсредствами.

Цель исследования. Определить дезинфицирующую активность Интерцид® (Тад Цид®) произведенного компанией InterHygieneGmbH , HaraldRieder, NeufelderStr. 30, 27472 Cuxhaven Интергигиена, Германия Германия в отношении возбудителя африканской чумы свиней (АЧС).

Материалы и методы.

 Исследования проводились в период 11 апреля по 25 июля 2011г. На культуре клеток костного мозга свиней. В своих исследования использовали дезинфицирующее средство Интерцид® (Тад Цид®) произведенного компанией InterHygieneGmbH, HaraldRieder, NeufelderStr. 30, 27472 Cuxhaven Интергигиена, Германия.

Испытания проводили в период с 16 октября 2013 года по 12 ноября 2013 года в соответствии с руководством «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности», Р 4.2.2643-10 утвержденному Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 01.06.2010 г., «Методическим указаниям о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики», утвержденным ГУВ Госагропрома СССР в 1987 г, с использованием биопробы и методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.1890-04, утвержденным Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 04.03.2004 г.

В исследованиях использовались следующие показатели:

Инфекционная активность вируса АЧС изолят Ставрополь в перевиваемой культуре клеток А4С2.

Минимальные бактериостатическая и бактерицидная концентрации средства «ИНТЕРЦИД®».

Дезинфицирующее действие средства «ИНТЕРЦИД®» на вирус АЧС с использованием тест-объектов (шероховатые поверхности из бетона) и постановкой биопробы на подсвинках массой 18-25 кг.

Получение культур тест-микроорганизмов

В пробирки со скошенным дрожжевым триптон-соевым агаром (ДТСА) засевали предварительно проверенные на отсутствие посторонней контаминации бактериальной и грибной микрофлорой культуры тест-микроорганизмов (Escherichiacoli и Staphylococcusaureus) впосевной дозе 103-106/мл. Посевы инкубировали при температуре (36±1)°С в течение 18-20 ч. Суточные культуры контролировали на отсутствие контаминантов. Для этой цели из полученных культур готовили мазки, окрашивали по Грамму и подвергали световой микроскопии. Затем агаровые культуры смывали физиологическим раствором.

Определение бактериостатической, бактерицидной активности дезинфекционного средства «ИНТЕРЦИД®» и влияния на их уровень высокомолекулярного белка

Предварительную оценку бактерицидного и бактериостатического действия средства «ИНТЕРЦИД®» проводили методом серийных разведений согласно методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.1890-04 в нашей модификации. Для определения минимальной бактерицидной концентрации средства «ИНТЕРЦИД®» готовили его серийные двукратные разведения на дрожжевым триптон-соевом бульоне (ДТСБ) от 0,5 % до 0,0009% в объеме 2,0 мл.

С использованием денситометра DEN-1 концентрацию микробных клеток в суспензиях тест-микроорганизмов (E. coliштамм К-12 и S. aureus штамм 209-P) доводили до 0,5 ЕД MF (106 м.т./мл).

В приготовленные разведения средства вносили инокулюм одной из культур в объеме 0,2 мл и инкубировали при температуре 370С.

Результаты учитывали визуально через 18-20 часов инкубации при 37°С по появлению роста культуры в пробирках (бактериостатическое действие). Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) определяли по наименьшей концентрации средства, которая подавляла видимый рост тест-микро­организма.

Контролем служили бульонные культуры микроорганизмов, в которые препарат не вносился.

Бактерицидное действие средств изучали по окончании исследований по определению бактериостатического действия. Для этого из пробирок, в которых видимый рост отсутствовал, по 0,2 мл высевали на ДТСА. Посевы инкубировали при 370С. Учет результатов проводили через 18-24 часа инкубирования и затем через 5 суток.

Минимальную бактерицидную дозу определяли по наименьшей концентрации средства, при которой отсутствовал рост микроорганизма на ДТСА.

Для изучения влияния высокомолекулярного белка на антимикробную активность проводили аналогичные испытания с добавлением в МПБ нормальной сыворотки крови лошади в конечной концентрации 40 %.

Определение инфекционной активности вируса АЧС в культуре клеток

Для определения инфекционной активности вируса АЧС готовили десятикратные последовательные разведения вируссодержащей крови на среде Игла-МЕМ (с 10-1 до 10-8), которые вносили в 4 пластиковых культуральных флакона объёмом 25 см3 с 1-2-х суточной культурой клеток А4С2. Инфицированную культуру А4С2 инкубировали в СО2 инкубаторе при (37±0,5)ºС в течение 6-7 суток. Наличие вируса в инфицированной культуре клеток определяли по феномену гемадсорбции (адсорбция эритроцитов свиней на инфицированных вирусом АЧС клетках). Титр вируса рассчитывали по методу Кербера в модификации И.П.Ашмарина и выражали в lgГАЕ 50/см3.

Оценка дезинфицирующего действия средства «ИНТЕРЦИД®» invivo

При исследованиях с вирусом, использовали вирулентный эпизоотически значимый вирус АЧС. На стерильные тест-объекты имитирующие объекты животноводческих помещений (впитывающие поверхности) наносили по 1,5 мл вируссодержащей жидкости на 100 см2. В качестве механической защиты вируса использовали стерильный свиной навоз в количестве 0,3 г., сухого вещества на 100 см2 поверхности, что составило 20% органических веществ в вируссодержащей жидкости. Перед нанесением на поверхность вируссодержащую суспензию тщательно перемешивали с соответствующим количеством навоза. Смесь равномерно распределяли на поверхности тестов, после чего их подсушивали 1-2 часа. Испытуемый 1,0 %-ный раствор средства «ИНТЕРЦИД®» равномерно наносили методом орошения на тест-объекты, из расчета 0,4 л/м2 площади.

На контрольные тест-объекты, вместо раствора средства «ИНТЕРЦИД®» наносили такое же количество водопроводной воды, которая использовалась для приготовления раствора средства.

С обработанных раствором дезинфектанта тест-объектов, испытуемые материалы отбирали через 2,0 часа. Вирусный материал соскабливали, добавляли по 4,5 мл среды Игла-МЕМ, экстрагировали при комнатной температуре в течение 30 минут, затем центрифугировали 15 минут при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость сразу использовали для постановки биопробы. Биопробу проводили на подсвинках: 3голов– опытных и 3 голов – контрольных.

Наблюдение за инфицированными подсвинками проводили в течение 21 суток. Дезинфекцию признавали эффективной, если свиньи опытной группы оставались клинически здоровыми на протяжении всего периода наблюдения при гибели животных контрольной группы.

Результаты исследований.

Антимикробную активность средства «ИНТЕРЦИД®» изучали в жидких и на твердых питательных средах с возбудителями колибактериоза и стафилококкоза с использованием белковой нагрузки и без нее.

Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) определяли методом серийных разведений в ДТСБ с последующим высевом на ДТСА на чашках Петри.

В таблице 1 представлены результаты изучения бактериостатического и бактерицидного действия дезсредства «ИНТЕРЦИД®».

Таблица 1

Антимикробная активность дезсредства «ИНТЕРЦИД®» в отношении E. coli и S. aureus

Тест-микроорг.

Вид

действия

Белковая защита

Концентрация препарата, % от исходного

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

E. coli

б/с

нет

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

б/ц

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

б/с

есть

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

б/ц

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

S. aureus

б/с

нет

-

-

-

-

+

+

+

+

+

+

б/ц

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

б/с

есть

-

-

-

-

+

+

+

+

+

+

б/ц

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

Примечание: 1 – 0,5 %; 2 – 0,25 %; 3 – 0,125; 4 – 0,0625; 5 – 0,0312; 6 – 0,0156; 7 – 0,0078; 8 – 0,0039; 9 – 0,0019; 10 – 0,0009; «-» - роста нет; «+» - рост есть; б/с – бактериостатическое действие; б/ц – бактерицидное действие.

В результате проведенных испытаний установлено, что дезсредство «ИНТЕРЦИД®»обладает антимикробной активностью в отношении тест-культур грамотрицательных (E. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов в следующих концентрациях, принимая средство за 100 % вещество:

·                       МПК E. coli – 0,125 %;

·                       МБК E. coli – 0,125 %;

·                       МПК S. aureus – 0,0625 %;

·                       МБК S. aureus – 0,125%.

При добавлении высокомолекулярного белка происходит незначительное снижение бактерицидной активности средства: белковый индекс для E. coli и S. aureus составляет 0 и 2, соответственно.

При определении инфекционной активности вируса АЧС изолят Ставрополь в виде вируссодержащей крови установлено, что титр вируса в культуре клеток А4С2 составляет 7,00 lg ГАЕ50/мл (гемадсорбирующих единиц).

Дезинфицирующее действие 1,0%-ного раствора средства «ИНТЕРЦИД®» в отношении вируса АЧС, которым были контаминированы впитывающие шероховатые тест-поверхности (бетон), определяли в экспериментах на свиньях. При этом норма расхода дезсредства при обработке тест-объектов составляла 0,4 л/м2.

Результаты испытаний дезинфицирующего действия дезсредства «ИНТЕРЦИД®» в отношении вируса АЧС с использованием биопробы представлены в таблице 2.

Таблица 2

Определение дезинфицирующего действия средства «ИНТЕРЦИД®» при обеззараживании тест-объектов из бетона, контаминированных вирусом АЧС в биопробе

п/п

Концентрация раствора по препарату, %

Норма расхода, л/м2

Экспозиция, час

Результаты заражения свиней смывами с тест-объекта бетон

пало/всего , голов

1

1,0

0,4

2,0

0/3

2

Контроль

-

-

3/3


Из данных таблицы 2 видно, что при орошении средством «ИНТЕРЦИД®» тест-объектов, контаминированных вирусом АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, поверхности из бетона обеззаражены 1,0 %-ным раствором при экспозиции 2,0 часа с нормой расхода дезсредства 0,4 л/м2.

Контрольные животные пало на 7 сутки после заражения.

Заключение.

Дезинфектант «ИНТЕРЦИД®» по результатам лабораторных исследований обладает бактерицидной и бактериостатической активностями в отношении тест-культур грамотрицательных (E. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрациях 0,125 % от исходной.

При испытаниях на сельскохозяйственных животных (биопроба) установлено, что полное обеззараживание тест-поверхностей, имитирующих объекты животноводческих помещений (шероховатые впитывающие поверхности из бетона) и контаминированных вирулентным эпизоотическим изолятом вируса АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза (20% органических веществ в вируссодержащей жидкости), было достигнуто при однократном орошении 1,0%-ным раствором дезинфектанта «ИНТЕРЦИД®» при экспозиции 2,0 часа. Норма расхода составляла 0,4 л/м2.

Дезинфицирующее средство «ИНТЕРЦИД®» обладает выраженным вирулицидным действием и рекомендуется для применения в очагах заражения АЧС для обработки объектов ветеринарного надзора в соответствии с «Правилами проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора», утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ 16.07.2002г., с целью полной инактивации вируса АЧС и предотвращения его распространения.

Ваш регион?

Федеральный округ:

Центральный ФО
Приволжский ФО
Сибирский ФО
Южный ФО
Северо-Западный ФО
Дальневосточный ФО
Крымский ФО
Северо-Кавказский ФО
Уральский ФО
Белгородская область
Брянская область
Владимирская область
Воронежская область
Ивановская область
Калужская область
Костромская область
Курская область
Липецкая область
Московская область
Орловская область
Рязанская область
Смоленская область
Тамбовская область
Тверская область
Тульская область
Ярославская область
Москва
Республика Башкортостан
Республика Марий Эл
Республика Мордовия
Республика Татарстан
Удмуртская Республика
Чувашская Республика
Кировская область
Нижегородская область
Оренбургская область
Пензенская область
Ульяновская область
Самарская область
Саратовская область
Пермский край
Республика Алтай
Республика Бурятия
Республика Тыва
Республика Хакасия
Алтайский край
Забайкальский край
Красноярский край
Иркутская область
Кемеровская область
Новосибирская область
Омская область
Томская область
Республика Адыгея
Республика Калмыкия
Краснодарский край
Астраханская область
Волгоградская область
Ростовская область
Республика Карелия
Республика Коми
Архангельская область
Вологодская область
Калининградская область
Ленинградская область
Мурманская область
Новгородская область
Псковская область
Город федерального значения Санкт-Петербург
Ненецкий автономный округ
Республика Саха (Якутия)
Камчатский край
Приморский край
Хабаровский край
Амурская область
Магаданская область
Сахалинская область
Еврейская автономная область
Чукотский автономный округ
Республика Крым
Город федерального значения Севастополь
Республика Дагестан
Республика Ингушетия
Кабардино-Балкарская Республика
Карачаево-Черкесская Республика
Республика Северная Осетия
Чеченская республика
Ставропольский край
Курганская область
Свердловская область
Тюменская область
Челябинская область
Ханты-Мансийский автономный округ — Югра
Ямало-Ненецкий автономный округ
Яндекс.Метрика